Laboratorní vyšetřovací metody - biochemické
Laboratorní vyšetřovací metody
n Biochemické VM
n Hematologické VM
n Cytologické a histologické VM
n Mikrobiologické VM ( bakteriologické, virologické, molekulárně biologické, serologické, parazitologické)
Biologický materiál
Krev B
Sérum S
Plazma P
Moč U
Stolice F
Mozkomíšní mok
Kostní dřeň
Žaludeční a duodenální šťáva
Sekrety ( hnis, sliny)
Punktáty
Tkáně
Sérum a plasma
n Krevní plasma je tekutá složka krve, kterou získáme odstředěním ( centrigugací) a oddělením sedimentu ( krevních elementů) z NESRÁŽLIVÉ KRVE
n Obsahuje všechny bílkoviny včetně koagulačních faktorů – fibronogenu
n Nesraženou krev získáme tak, že odebíráme krev do zkumavky s protisrážlivým činidlem ( EDTA= fialový uzávěr, Li-heprin=zelený uzávěr)
n Požívá se hlavně pro stanovení srážlivosti krve ( viz hematologické vyšetření) a pro některá biochemická vyšetření
n Krevní sérum – tekutá složka krve, kterou získáme cenrifugací a oddělením krevního koláče ze SRAŽENÉ KRVE = NEOBSAHUJE KOAGULAČNÍ FAKTORY ( fibrinogen a jiné) protože se při vysrážení krve spotřebovaly
n Sraženou krev získáme odběrem do zkumavky BEZ antikoagulačních činidel = s červeným nebo žlutým uzávěrem.
n Postačí pro ´drtivou většinu biochemických vyšetření krve.
Tři části laboratorního vyšetření
n 1. Předanalytická část ( bude se týkat i vás)
n Příprava pacienta na vyšetření
n Správný odběr bilogického vzorku
n Správné označení vzorku a správně vyplněná žádanka ( vyloučení záměny vzorku)
n Správné uchování a transport do laboratoře
n 2. Analýza vzorku v laboratoři
n 3. Vyhodnocení výsledku lékařem +porovnání s výsledky ostatních vyšetření = diagnostický úsudek ( případně úsudek o průběhu a prognóze onemocnění), spolupráce s laboratoří
Předanalytická část –
1. odběr biologického materiálu
• 1.Stanadartizovaným způsobem
• 2.Stndart pro odběr žilní a kapilární krve http://laboratore.vfn.cz/vysetreni/dokumenty/SPP-UKBLD-OC-1.pdf
Podrobný postup pro odběr ostatních bilologických vzorků
http://ukb.lf1.cuni.cz/dokumenty/preanalytika.pdf
Ve správné poloze. (např. při odběru krve z loketní žíly je vhodné pro stanovení většiny analytů zajistit polohu vsedě po dobu 15 minut před odběrem . Odběr krve ve stoje vede ke zvýšené koncentraci bílkovin v séru,)
• 3.Správná zkumavka ( sterilní pro mikrobiologické vyšetření, prázdná pro vyšetření séra – zlatá, s protisrážlivým činidlem (EDTA – fialová nebo Li- heparin -zelená) pro vyšetření srážlivosti krve, se stabilizačním činidlem pro histologické vyšetření)
• Výběr správného biologického materiálu a správné zkumavky pro stanovení zadaného analytu (testu) vám usnadní seznam: http://laboratore.vfn.cz/vysetreni/result.php?start=191
• http://ukb.lf1.cuni.cz/data/result.php?start=1&setNormal=50
• U některých vyšetření jsou uvedeny i specifické podmínky pro uchování a transport vzorku
• 4.Správné označení vzorku ( lepící štítek se jménem a RČ a pojišťovnou nebo čárový kód)
• 5.Správně vyplněná průvodka
2.Uchování biologického materiálu
• Např. srážlivá krev ( pro vyšetření iontů, enzymů, bílkovin) by se měla nechat stát na místě odběru 5-10 min ( aby nedošlo k rozpadu červených krvinek ( hemolýze) a tím k znehodnocení vzorku). Nikdy s krví netřepat!!! Pouze pomalu otáčet dnem vzhlru a nazpět.
• U některých vzorků je nutné okamžitě dát do lednice ( např. homocystein)
• Moč na vyšetření močovéhho sedimentu by měla být vyšetřena do jedné hodiny po odběru
• Moč na mikrobiologické vyšetření při pokojové teplotě do dvou hodin v laboratoři nebo nutno uchovat v lednici při teplotě 4-8 ºC.
3.Transport biologického materiálu –
• RYCHLÝ A ŠETRNÝ a při adekvátní teplotě. Pokud je v rámci nemocnice, postačí většinou pokojová teplota. ( až na některé výjimky)
• Vždy počítat s tím, že biologický materiál může být INFEKČNÍ, proto se používají pro transport na delší vzdálenost speciální boxy.
Biochemické vyšetření
n Určuje koncentraci látek anorganických a organických obsažených v biologickém materiálu a aktivitu enzymů
n Až 70% veškerých pomocných vyšetřovacích metod
n Citlivě ukazuje změnu rovnováhy vnitřního prostředí ( homeostázy) a tedy ukazuje na vznik nemoci, odráží i její průběh
n Změny koncentrace některých látek ( tedy patologický výsledek biochemického vyšetření) často prokáží nebo upozorní na onemocnění dříve, než se u pacienta objeví klinické projevy- proto se některá používají screeningově v rámci sekundární prevence k včasnému záchytu onemocnění – např. prostatický anigen (PSA – marker karcinomu prostaty), biochemický screening na vrozené vývojové vady v těhotenství, sreening metabolických vad u novorozenců)
Dělení biochemických vyšetření
n Dle dostupnosti:
1. Základní běžně dostupná rychle, v nemocnici nepřetržitě
2. Specializovaná
3. Vysoce specializovaná – centrálně jen ve vybraných laboratořích – drahá, nutný dostatek zkušeností pro zpracování vzorku i pro interpretaci výsledků.
4. Vyšetření na místě ( POCT „point of care testing“) u lůžka pacienta.
n Pomocí diagnostických proužků vyš z krve nebo moči – gkykemie, ASTRUP-acidobazická rovnováha a množství kyslíku v arteriální krvi jednoduché, okamžitý výsledek, CRP.
n Dle rychlosti provedení vyšetření
n Rutinní
n Statimová STATIM – v lab. Zpracovány přednostně do 2-3 hod po dodání do laboratoře.
n Vitální indikace jde o život pacienta – zpracovány musí být IHNED, do 45 min. od dodání do laboratoře.
Biochemocké vyšetření krve
Příprava pacienta :
Lačnit po dobu nejméně 10-12 hodin, omezit (ale ne zcela vyloučit) příjem tekutin na nezbytné množství, avšak jen v podobě čisté vody nesycené kysličníkem uhličitým, bez příchuti, nesladké.
n • Vyloučit alkohol a tabákové výrobky.
n • Omezit tělesné aktivity na minimum.
n • Vyvarovat se stresu.
n • Vyloučit, pokud může ovlivnit laboratorní vyšetření a pokud lze, medikamentózní terapii dle pokynů ošetřujícího lékaře. ( Medikaci uvést na žádance)
n • Pokud lze, vyloučit odběr v době menstruačního krvácení.
Základní biochemocké vyšetření krve:
n Biologickým materiálem je SĚRUM z venózní krve, případně plazma
n Koncentrace iontů - mineralogram ( Na, K, Cl, Ca, Mg,) (mmol/l)
n Močový panel – urea, kreatinin, kyselina močová ( mmol/l)
n Jaterní panel – Aktivita enzymů ALT, AST, GMT ( transferázy), ALP, AMS ( amyláza) ( µkat/l)
n .
n - bilirubin celkový, konjugovaný ( µmol/l)
n Lipidové spektrum ( cholesterol HDL, LDL, TAG= triacylglyceroly) <mmol/l>
n Glykémie <4,2-6,3 mmol/l>
n Celková bílkovina (CB), albumín <g/l>
n Reaktanty akutní fáze – CRP 10 mg/l
n Metabolismus železa- Fe, ferritin, transferin
n Hormony – TSH,, fT4 <pmol/l>
n Tumorové markery ( CEA,AFP, Ca19-9, PSA- prostatický antigen) <kIU/l>
n Kardiomerkey- prokazují infarkt myokardu – CK, troponim I, T, myoglobin ( µg/l)
n Léky – Digoxin, Antiepileptika, psychotropní látky
n Alkohol, drogy
n Vitamíny
n ASTRUP - Acidobazická rovnováha – z arteriální krve
Glykémie:
n koncentrace (hladina) glukózy v krevní plazmě ( nebo séru)
n Normální glykémie se pohybuje v rozmezí
n 4,2-6,3 mmol/l
n Hypoglykémie= snížená glykémie ( pamatujte si pod 4 mmol/l)
n Hyperglykémie = zvýšená glykémie ( pamatujte si nad 7 mmol/l)
Výsledky biochemockého vyšetření - alarmující příznaky
n Nálezy v séru:
n K-draslík:!!! pod<2,9 mmol/l,nad > 6,5 mmol/l
n Glykémie: pod 2,5 mmol/l, nad 20 mmol/l
n Moč: silně pozitivní glukóza + ketolátky ( aceton)´- dekompenzovaný diabetes
Biochemocké vyšetření moče:
Odběr vzorku
1. Moč na vyšetření chemicky a sedimentu
n Vzorek 10 ml první ranní moče. Důležité je, aby do zkumavky byl odebrán střední proud moče (první proud do WC, pak střední do zkumavky, ostatní do WC) po důkladné očistě genitálu – osprchovat, ne mýdlo. Na vyšetření moče mikroskopicky (močového sedimentu) je třeba vzorek doručit do laboratoře maximálně do 1 hodin po vymočení. Nepoužívejte znečištěné skleněné nádoby nebo obaly od drogistických výrobků
2. Sběr moče za 24 hodin
n Pacient obvykle zahajuje sběr ráno v 6.00 hodin. Tehdy se naposled vymočí do WC a začíná sbírat moč do dostatečně velké nádoby následujících 24 hodin. Naposled se vymočí do nádoby v 6.00 hodin následujícího rána. Ambulantní pacienti dodají do laboratoře celý nasbíraný objem, pokud nemají možnost změřit s přesnosti na 10 ml, a to s co nejmenší prodlevou (v lékárně fakultní polikliniky si lze koupit pro sběr moče cejchovanou umělohmotnou nádobu objemu 2l). Za správný sběr moče u lůžkových pacientů zodpovídá oddělení. Zpravidla se dodává vzorek 10 ml moče po důkladném promíchání celého objemu moče s uvedením přesného objemu a času sběru.
3. Vyšetření močového sedimentu podle Hamburgera
n Abychom mohli vyšetření provést, potřebujeme znát naprosto přesně objem moče vyloučené za přesnou dobu sběru. Řiďte se důsledně následujícími pokyny:
n • Sběr začíná v určený den přesně v .............hodin (čas zahájení sběru moče), kdy se pacient naposledy důkladně vymočí na záchodě MIMO sběrnou nádobu. Od té doby pacient močí veškerou moč do sběrné nádoby (zcela čisté a suché uzavíratelné sklenice).
n • Sběrné období trvá 3 hodiny.
n • Po třech hodinách sběru moče se pacient vymočí do sběrné nádoby naposledy, obvykle jde pouze o jediné močení do sběrné nádoby. Nemůže-li se vymočit přesně za 3 hodiny, lze připustit dobu v rozmezí 2,5 až 3,5 hodiny. Na štítku a žádance musí být vždy uveden čas zahájení sběru moče a čas posledního močení do sběrné nádoby (tj. začátek a konec sběrného období). První a druhý čas uvádějte s přesností na minuty.
n • Močení do sběrné nádoby je vhodné provést po hygienické očistě genitálu, u žen po sedací koupeli.
n • Během pokusu by mělo dítě ve věku do 8 let vypít 100 - 200 ml (1 -
Vyšetření moče chemicky
1.Kvalitativně (určí pouze, zda je, či není přítomna v moči určitá látka, případně orientačně určí množství rozpuštěné látky.
n Pomocí testovacích ( indikátorových) proužků – českých i zahraničních – obsahují až 10 testovacích plošek.
n Krev
n Bílkoviny
n Ketolátky
n Žlučová barviva ( bilirubin, urobilinogen)
n Glukóza
n Leukocyty
n Amyláza
n Nitrity
n Pomocí refrakčních fotometrů
2.Kvantitaivně – množství látky obsažené v moči, která se sbírá za 24 hodin
n nejčastěji se určuje bílkovina – proteinurie ( normální je pod 0,150 g/24 hodin)
n Glukóza za 24 hodin u DM
Mikroskopické vyšetření moče
n =vyšetření močového sedimentu
n Vyšetřuje se sediment odstředěné moči.
n MOČ NESMÍ BÝT STARŠÍ, NEŽ 2 HODINY
n Semikvantitativně počet buněk nebo elmentů na zorné pole mikroskopu
n Kvantitativně – Hamburgerova metoda
n Moč se sbírá přesně 3 hodiny, výsledek je počet buněk za minutu.
n Co nalézáme:
n Erytrocyty
n Leukocyty
n Bakterie
n Spermie
n Válce
n Epitelie
Náhledy fotografií ze složky Laboratorní vyšetření